猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6/7基因真核载体的构建
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广东省科技计划项目(2007A020300064);广东省自然科学基金创新团队项目(5200638);教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(TRT0723)


Construction of Eukaryotic Expressing Vector from ORF5/6/7 of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus
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    摘要:

    针对PRRSV ORF5~ORF7设计3对特异性引物,以PRRSV GD-XH株和GD08-1株为模板进行RT-PCR扩增,并将扩增产物克隆到真核表达载体pEGFP-N1 中,获得重组质粒 pEGFP-N1-(ORF5~ORF7),然后将重组表达质粒转染Marc-145细胞.通过荧光显微镜观察显示,重组质粒 pEGFP-N1-(ORF5~ORF7)和载体 pEGFP-N1 均有绿色荧光出现.结果表明:成功构建了表达PRRSV GD-XH株和PRRSV GD08-1株的GP5、M、N蛋白的真核表达质粒pEGFP-N1-GD-XH-GP、pEGFP-N1-GD-XH-M、pEGFP-N1-GD-XH-N、 pEGFP-N1-GD08-1-GP5、 pEGFP-N1-GD08-1-M、pEGFP-N1-GD08-1-N.

    Abstract:

    Specific primers aiming to ORF5-ORF7 of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRSV) were designed. The target segments with restricted enzyme digestive sites were obtained by RT-PCR with PRRSV GD-XH and GD08-1 as template. All the segments were inserted into vector pEGFP-N1 to obtain six recombinant plasmids: pEGFP-N1-GD-XH-GP5, pEGFP-N1-GD-XH-M, pEGFP-N1-GD-XH-N, pEGFP-N1-GD08-1-GP5, pEGFP-N1-GD08-1-M, pEGFP-N1-GD08-1-N.The recombinant plasmid was transfected into Marc-145 cell. Fluorescence microscopy showed that EGFP were expressed in all transfected cells.

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    引证文献
引用本文

康艳梅,赵明秋,沈海燕,琚春梅,陈金顶.猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6/7基因真核载体的构建[J].华南农业大学学报,2012,33(2):256-258

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  • 收稿日期:2011-04-22
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  • 在线发布日期: 2012-04-27