文昌鸡产自海南省文昌市，是海南省唯一地方优良肉鸡品种，它以体型方圆、脚胫短细、皮薄骨酥、肉质嫩滑的特点广受大家的喜爱。但海南地区常年处于高温天气，有效控制热应激引起的不良影响是提高文昌鸡养殖生产水平的关键。目前，抗生素作为促生长剂的弊端不断地被大家所认识，饲料添加剂条例中关于抗生素添加的限制日趋严格，饲料中可以添加的促生长抗生素越来越少。同时滥用抗生素使动物机体微生态平衡失调，出现耐药性和药物残留等问题^[1]。研究者一直在探索和寻找可以替代抗生素，且健康、环保、有效的新型添加剂。大豆异黄酮是一种从植物中提取的新型生长促进剂、抗氧化剂，其关键有效成分为生物活性苷元^[2-3]。Cassidy^[4]研究发现，在白羽肉鸡饲粮中添加大豆异黄酮能够显著提高其体质量和采食量。高峰等^[5]研究认为，在饲粮中添加5 mg·kg^–1大豆异黄酮能够显著提高伊莎蛋公雏鸡的免疫器官质量和饲料转化率。目前鲜有研究报道大豆异黄酮替代抗生素对文昌鸡的影响作用。本试验旨在研究大豆异黄酮取代抗生素对文昌鸡生长性能、肉品质及血浆抗氧化指标的影响，为大豆异黄酮在文昌鸡养殖的实际应用中提供参考依据。

试验选用1日龄、健康、发育良好的文昌鸡母雏540只。试验分3个处理组，每组4个重复，每个重复45只鸡。处理组1为空白对照组，饲喂基础饲粮；处理组2为抗生素组，饲喂添加抗生素(3 mg·kg^–1恩诺沙星)的基础饲粮；处理组3为大豆异黄酮组，在基础饲粮中添加大豆异黄酮(1~30日龄、31~80 日龄、81~120日龄3个阶段大豆异黄酮添加量分别为25、20、15 mg·kg^–1)，大豆异黄酮由广东新南都饲料科技有限公司提供。试验采用玉米–豆粕型基础饲粮，营养水平参考我国《鸡饲养标准》(NY/T33—2004)^[6]，根据《中国饲料成分及营养价值表(27版)》^[7]设计饲料配方。具体试验成分及营养价值见表1。全期120 d，根据海南省农业科学院畜牧兽医研究所指导将文昌鸡生长发育分为3个阶段进行，小鸡阶段(1~30 日龄)、中鸡阶段(31~80 日龄)和大鸡阶段(81~120 日龄)。

表 1 Table 1

表 1 试验基础饲粮组成及其营养水平(风干基础) Table 1 The composition and nutrients level of basal diets (air-dry basis) 日龄/d 饲料组成及质量分数/% 玉米 豆粕 鱼粉 麸皮 大豆油 石粉 磷酸氢钙 食盐 L–赖氨酸盐 DL–蛋氨酸 1~30 50.59 32.20 3.00 3.00 4.50 1.28 1.00 0.30 0 0.13 31~80 61.60 21.60 3.00 3.00 4.20 1.25 0.85 0.30 0.09 0.11 81~120 66.75 17.00 3.00 3.00 4.00 1.09 0.70 0.30 0.07 0.09 日龄/d 预混料1) 代谢能/(MJ·kg–1) 营养成分及质量分数/% 粗蛋白质 钙 总磷 非植酸磷 赖氨酸 蛋氨酸 1~30 4 12.23 21.06 0.99 0.68 0.45 1.16 0.45 31~80 4 12.56 17.40 0.90 0.61 0.40 0.99 0.40 81~120 4 12.73 15.78 0.79 0.56 0.37 0.85 0.36 　1)预混料为每千克饲粮提供：维生素 A 1.5×104 IU，维生素 D3 0.33×104 IU，维生素 E 62.5 mg，维生素 B1 3 mg，维生素 B2 9 mg，维生素 B6 6 mg，维生素B12 0.03 mg，烟酸60 mg，泛酸钙18 mg，叶酸1.5 mg，生物素0.36 mg，氯化胆碱600 mg，Fe 80 mg，Cu 12 mg，Zn 75 mg，Mn 100 mg，I 0.35 mg，Se 0.15 mg；2)粗蛋白质、钙和总磷为实测值，其余均为计算值

表 1 试验基础饲粮组成及其营养水平(风干基础) Table 1 The composition and nutrients level of basal diets (air-dry basis)

试鸡采用笼养，自由采食颗粒料和饮水，小鸡阶段：室温保持32 ℃，24 h持续光照(白天自然光照，夜间灯光照明)；中鸡和大鸡阶段：室温分别保持在开放鸡舍，每天16 h自然光照，不额外补充光照。其他按常规饲养操作规程饲养和常规免疫程序免疫。

试鸡于30、80、120日龄前1 d22:00断料供水，次日9:00以重复为单位准确称鸡空腹质量，对剩料称质量，统计每个重复耗料量，计算平均日增质量、平均日采食量、料重比。及时记录鸡只死亡情况，计算死亡率(试验过程中，一旦出现死鸡，立即称死鸡质量和剩料质量，以消除死鸡对最后试验结果的影响)。

试鸡120日龄时，从每个重复组选取3只鸡进行屠宰，摘取两侧胸肌，用于测定胸肌肉色、pH和熟肉率。

肉色测定：屠宰后胸肌在常温下放置45 min之后，用色差计(CR-410，日本)测定胸肌的亮度(L^*)、红度(a^*)、黄度(b^*)。每个样品测定3次，取平均值。

pH测定：屠宰后胸肌在常温下放置45 min之后，利用肌肉pH计(HI8242，HANNA，意大利)测定pH，每个样品测定3次，取平均值。

熟肉率的测定^[8]：取约100 g左右的肉样并记录其煮前质量，然后75 ℃水浴煮45 min，晾至室温后记录其煮后质量计算熟肉率：

熟肉率=(蒸煮后肉样质量/蒸煮前肉样质量)×100%。

于试鸡80、120日龄时，每个重复选取3只平均体质量鸡，翅静脉采血6 mL，分离血浆，于–20 ℃ 冰箱保存，使用酶标仪(Sprc-trsaMax-5型，美国瓦里安公司)测定血浆中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)和谷胱甘肽(Glutathione，GSH)含量、肌酸激酶(Creatine kinase，CK)活性和总抗氧化能力(Total antioxidant capacity，T-AOC)，检测试验盒均购自南京建成生物工程研究所，具体检测方法参照试剂盒说明书进行，1 min内1 μmol的底物所需要的酶量记为1个酶活力单位(U)。

试验数据用SPSS17.0进行方差分析(One-way ANOVA)和多重比较(Duncan’s法)。各组试验数据均以平均值±标准误表示。

由表2可知，小鸡阶段，各处理组之间的平均日增质量、平均日采食量和料重比均无显著差异(P>0.05)。中鸡阶段，与对照组相比，大豆异黄酮组平均日增质量显著提高(P<0.05)；大豆异黄酮组的平均日增质量和平均日采食量与抗生素组相比均略有提高(P>0.05)。大鸡阶段，大豆异黄酮组的平均日采食量显著高于对照组(P<0.05)。

表 2 Table 2

表 2 大豆异黄酮对文昌鸡生长性能的影响1) Table 2 Effects of soy isoflavone on growth performance of Wenchang chickens 日龄/d 处理 平均日增质量/g 平均日采食量/g 料重比 死亡率/% 1~30 对照组             10.02±0.09             19.88±0.35             1.98±0.04 抗生素组 10.26±0.69 20.48±0.52 2.00±0.12 大豆异黄酮组 10.21±0.36 20.34±1.41 1.99±0.08 31~80 对照组 14.12±0.18b 45.78±2.57 3.24±0.12 3.45±3.02 抗生素组 14.40±0.17ab 48.37±3.08 3.36±0.11 3.05±4.62 大豆异黄酮组 14.50±0.05a 48.77±4.02 3.36±0.29 1.70±2.11 81~120 对照组 11.84±0.62 63.88±2.90b 5.40±0.06 0.61±1.22 抗生素组 11.08±1.41 63.65±1.89ab 5.81±0.67 2.47±2.04 大豆异黄酮组 11.46±1.23 65.42±3.90a 5.73±0.33 0.63±1.25 　1)表中数据为平均值±标准误；相同日龄的同列数据后，凡是有一个相同小写字母或未标注字母者表示差异不显著(n=4，P>0.05, Duncan’s 法)

表 2 大豆异黄酮对文昌鸡生长性能的影响1) Table 2 Effects of soy isoflavone on growth performance of Wenchang chickens

由表3可知，各处理组的肉色L^*、a^*、b^*和pH差异均不显著(P>0.05)。与对照组相比，大豆异黄酮组的熟肉率显著提高(P<0.05)。

表 3 Table 3

表 3 大豆异黄酮对文昌鸡胸肌肉品质的影响1) Table 3 Effects of soy isoflavone on meat quality of breast muscle of Wenchang chickens 处理 肉色 pH 熟肉率/% L* a* b* 对照组          54.47±0.45          12.40±0.32          14.86±0.66          5.82±0.07          68.77±0.80b 抗生素组 55.21±0.82 12.29±0.59 16.73±0.68 5.81±0.10 69.70±0.74ab 大豆异黄酮组 56.75±0.82 11.78±0.40 15.66±0.65 5.64±0.05 77.11±1.17a 　1)表中数据为平均值±标准误；同列数据后，凡是有一个相同小写字母或未标注字母者表示差异不显著(n=12，P>0.05, Duncan’s 法)

表 3 大豆异黄酮对文昌鸡胸肌肉品质的影响1) Table 3 Effects of soy isoflavone on meat quality of breast muscle of Wenchang chickens

由表4可知，中鸡阶段，与抗生素组相比，大豆异黄酮组的MDA浓度降低了12.3%，但差异不显著(P>0.05)；大豆异黄酮组的T-AOC显著高于抗生素组(P<0.05)。大鸡阶段，大豆异黄酮组的CK活性显著低于抗生素组，GSH质量浓度显著高于抗生素组(P<0.05)；抗生素组和大豆异黄酮组的T-AOC显著高于对照组(P<0.05)。

表 4 Table 4

表 4 大豆异黄酮对文昌鸡血浆抗氧化指标的影响1) Table 4 Effects of soy isoflavone on plasma antioxidant indexes of Wenchang chickens 处理 c(MDA)/(nmol·mL–1) 肌酸激酶(CK)/(U·mL1) ρ(谷胱甘肽, GSH)/(mg·L–1) 总抗氧化能力 (T-AOC)/(U·mL–1) 80日龄 120日龄 80日龄 120日龄 80日龄 120日龄 80日龄 120日龄 对照组 2.43±0.20 2.77±0.46 1.55±0.17 0.86±0.11ab     6.11±0.22     11.30±0.51ab     8.55±0.48a     4.93±0.65b 抗生素组 3.01±0.08 2.51±0.08 1.07±0.08 1.15±0.19a 8.09±1.13 8.79±0.07b 6.22±0.33b 9.24±0.07a 大豆异黄酮组 2.64±0.29 2.97±0.35 0.91±0.10 0.58±0.07b 7.02±0.31 12.10±0.62a 8.05±0.37a 9.03±1.37a 　1)表中数据为平均值±标准误；同列数据后, 凡是有一个相同小写字母或未标注字母者表示差异不显著(n=12，P>0.05, Duncan’s 法)

表 4 大豆异黄酮对文昌鸡血浆抗氧化指标的影响1) Table 4 Effects of soy isoflavone on plasma antioxidant indexes of Wenchang chickens

目前关于大豆异黄酮对于畜禽生长性能影响的报道结论不一。饲粮中添加大豆异黄酮能够提高肥育猪和岭南黄羽肉鸡的生长性能^[9-10]。Wilhelms等^[11]研究发现，在饲粮中添加质量分数为1%或5%的大豆异黄酮均对日本鹌鹑的生长性能无显著影响。Payne等^[12]报道在商品肉鸡饲粮中添加大豆异黄酮会引起平均日采食量和平均日增质量下降。本文结果显示，在中鸡阶段，大豆异黄酮组与对照组相比能够显著提高文昌鸡的平均日增质量，而抗生素组与对照组并无显著差异，说明在中鸡阶段，大豆异黄酮组对于文昌鸡的促生长作用已经优于抗生素组。在大鸡阶段，大豆异黄酮组的平均日采食量显著高于对照组，大豆异黄酮组的平均日增质量和平均日采食量比抗生素组分别提高3.3 %和2.7 %，进一步的说明大豆异黄酮对于文昌鸡的促生长作用优于抗生素组，原因可能与大豆异黄酮可以提高促进机体合成代谢、动物生长的IGF-Ⅰ水平^[13-14]相关，可能也与大豆异黄酮具有雌激素活性有关^[15]，有研究者发现雌激素对肠道消化吸收有影响^[16-17]，林厦菁等^[18]研究发现添加大豆异黄酮可以显著提高黄羽肉鸡十二指肠雌激素受体ESRα的表达水平。

系水力是肉品质的一个关键指标，系水力差，会导致水溶性营养物质过度损失，适口性不佳，熟肉率越高，系水力则越好^[19-20]。Jiang等^[9]在对快大型黄羽肉鸡试验中发现，饲粮中添加大豆异黄酮能够提高其肉品质。王晓方等^[21]的研究结果也显示在饲粮中添加大豆异黄酮可以增加肌肉中肌苷酸的含量，从而改善肉品质。本试验结果显示，饲粮中添加大豆异黄酮可以显著提高文昌鸡胸肌的熟肉率，提示大豆异黄酮有改善文昌鸡肉品质的作用。Zhang等^[22]研究发现，在猪饲粮中添加白藜芦醇可以显著提高机体的抗氧化能力和猪肉品质。Young等^[23]研究发现在鸡饲粮中添加抗坏血酸、牛至可以缓解应激从而提高鸡肉品质。根据以上研究推测，大豆异黄酮可能是通过提高机体抗氧化水平和熟肉率从而改善肉品质。

T-AOC、GSH含量是评价机体抗氧化水平的重要指标^[24-25]，机体受到各种应激因子的刺激会引起血液中CK活性的增加^[26]。目前，已有研究报道大豆异黄酮中的主要活性物质—高活性生物苷元对肉鸡的抗氧化水平具有重要的影响作用^[27-29]。Lin等^[30]研究发现，大豆异黄酮代谢产物雌马酚可以提高鸡小肠上皮细胞的抗氧化水平。Dixit等^[31]研究发现，大豆异黄酮抗氧化能力非常强，能够保护机体免受γ射线诱导的氧化损伤。本试验的血浆抗氧化指标结果显示，中鸡阶段，大豆异黄酮组的T-AOC显著高于抗生素组，与抗生素组相比，大豆异黄酮组的MDA浓度的平均值降低了12.3%。大鸡阶段，大豆异黄酮组的CK活性显著低于抗生素组，GSH质量浓度显著高于抗生素组。说明饲粮中添加大豆异黄酮可以提高文昌鸡的抗氧化能力。

张罕星等^[32]研究发现在肉鸭饲粮中添加大豆异黄酮，能够缓解机体氧化应激，且优于抗生素。张玉宏等^[33]在对快大型黄羽肉鸡上的研究中也获得相似的结果。本试验数据显示在文昌鸡饲粮中添加适量的大豆异黄酮能够提高文昌鸡的生长性能和抗氧化水平，并且这个效果优于抗生素。分析原因可能是在整个试验期过程中，养殖环境控制较好，试验鸡群没有爆发过细菌性疾病感染，生长性能正常，所以抗生素组与对照组相比，没有出现明显改善生长性能的效果。而大豆异黄酮具有抗氧化的功能，能清除机体内的氧氮自由基，具有缓解试验鸡氧化应激的作用，从而有明显的促生长效果。

中鸡阶段饲粮中添加20 mg·kg^–1大豆异黄酮可以提高鸡日增质量和抗氧化水平；大鸡阶段饲粮中添加15 mg·kg^–1大豆异黄酮能够提高鸡采食量、熟肉率和抗氧化水平。