广东省科技计划项目(2KM03507N),国家自然科学基金资助项目(39770033)
根据伪狂犬病毒(PRV)NLA-3和Rice株的gE基因序列,设计了1对含有起始密码子和HindⅢ、BarnHI酶切位点的引物,以PRV粤A毒株(PRV-YA)基因组为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增获得gE基因片段,将这一片段克隆至PMDl8-T载体中,获得重组质粒PMID18-gE;用HindⅢ和BarnHI酶切该重组质粒,回收得到含有以上2个酶切位点粘端的gE基因,将此基因片段克隆至相同酶切、回收后的pcDNA3.1( )真核表达载体中,获得真核表达重组质粒pcDNA3.1-gE,经PCR鉴定、限制性内切酶分析和克隆片段的序列测定、比较,证实了克隆片段的可靠性。
吴德铭,黄毓茂,罗满林,刘镇明,邬苏晓.伪狂犬病毒粤A株gE基因真核表达质粒的构建[J].华南农业大学学报,2003,24(3):69-72