广东省自然科学基金;高等学校博士学科点专项科研项目
根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列(GenBank号:D13154)设计并合成1对覆盖编码区58~1249位核苷酸的引物,以家鸡垂体总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得了特异性片断,将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌Ecoli DH5α永久保存.通过设计第2对引物扩增PRLR胞外域cDNA片段,该片段经酶切后克隆到表达载体pRSETA的EcoRⅠ和HindⅢ两酶切位点之间,构建重组质粒pR-PRLR.该质粒在转化感受态细菌E.coli B121(DF.3)后,在IPTG诱导下促使重组菌表达了相对分子质量为53640左右的重组融合蛋白,表达量在0.1mmol/L IPTG诱导5h时达到最高,约占总菌体蛋白的17.6%左右.表达产物可经体积分数为50%的Ni-NTA凝胶纯化,说明重组蛋白中具有正确的His-tag标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列.
刘颖,黎敏义,刘志,李孝伟,施振旦.鸡催乳素受体胞外域的分子克隆及原核表达[J].华南农业大学学报,2006,27(4):73-77