猪白细胞介素18成熟蛋白基因克隆及在不同原核表达系统中的表达
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国家科技攻关计划 , 河南省高校杰出科研创新人才工程项目


Cloning of Procine Interleukin-18 Mature Gene and Its Expression in Different Prokaryotic Expression Vectors
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    摘要:

    RT-PCR方法直接从猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪白细胞介素18成熟蛋白基因的cDNA,克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-T pIL18,转化E.coli JM109感受态细胞,取PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定.测序结果表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将其分别克隆到表达载体pQE30、pET-28a、pGEX6P-1中,构建重组表达质粒pQE-mpIL18、pET-mpIL18、pGEX-mpIL18.用IPTG诱导表达,重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量分别为19 000、21 000、45 000的重组蛋白.经薄层扫描分析,pQE-mpIL18、pET-mpIL18、pGEX-mpIL18菌体裂解物分别占菌体总蛋白的17%、28%、27%,均以包涵体形式存在.

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引用本文

郑兰兰,崔保安,陈红英,贾云飞,陈瑞亮,方忠意.猪白细胞介素18成熟蛋白基因克隆及在不同原核表达系统中的表达[J].华南农业大学学报,2008,29(3):

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